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检测原理
试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（
ELISA）。往预先包被轮状病毒抗原的包被微孔中，
依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下
转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（
OD 值），与CUTOFF
值相比较，从而判定标本中瘟热病毒抗体（
CDV-Ab）的存在与否。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右（
2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存
过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心 20 分钟左右
（
2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（
2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀
形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右（
2000-3000 转/分）。仔细
收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（
PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右（
2000-3000 转/分）。仔细收集
上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（
PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20
分钟左右（
2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可
将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（
HRP）含量。
自备物品
1. 酶标仪（
450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
操作注意事项
1. 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，
水浴加热使结晶完全溶解后再使用。咨询电话：021-60346444
网址：www.rjkit.com
2.
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3. 预处理后的样本无需稀释，直接取 50μL 加样即可。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的蒸馏水。
洗板方法
1. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗
板 5 次。
2.
自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各 50μL；
3. 待测样本孔加待测样本 50μL；
4.
随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（
HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜
封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板
5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 100μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。咨询电话：021-60346444
网址：www.rjkit.com
结果判断
1. 试验有效性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；
阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15。
2.
临界值（
Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15
3.
阴性判断：样品 OD 值＜临界值（
Cut off），样品为阴性
4.
阳性判断：样品 OD 值＞临界值（
Cut off），样品为阳性
试剂盒性能
1. 准确性：阳性对照孔 OD 值平均值≥1.00；阴性对照孔 OD 值平均值≤0.15，说明试验结果有效。
2. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 15%。
4. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
1. 有效期：6 个月
免责声明
1.
试剂盒仅供研究使用，不得用于临床诊断实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概
不负责。
2.
严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。
(pdf)
