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线性范围：0.31-20 ng/mL
1. 预期用途
本试剂盒设计用于定量检测血清、血浆、组织匀浆、细胞上清、细胞裂解物等样本中的左炔诺孕酮浓度，仅供研究使用，不得用于医学诊断。
2. 检测原理
试剂盒采用竞争法原理：将合成半抗原包被于酶标板上，同时加入样品和抗体试剂（一抗），样品中的待测物与半抗原上偶联的待测物竞争结合抗体（一抗），结合形成“半抗原-抗体”免疫复合物，清洗去除游离的免疫复合物后，加入TMB显色，样本中待测物浓度越高蓝色越浅，加入终止液，用酶标仪在450 nm处测OD值，颜色的深浅和样品中的待测物含量呈反比，通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。
3. 包含的实验材料实验材料
| 名 称 Label | 组成成分 Kit Components | 数量（48T） Quantity | 数量（96T） Quantity |
| 酶标板 | 预包被半抗原的酶标板 | 8×6条 | 8×12条 |
| 校准品（1×） | 校准品20 ng/mL | 1支×1.0mL | 1支×1.0mL |
| 一抗抗体 | 检测抗体 | 1支×6mL | 1支×12mL |
| 酶标二抗 | HRP标记二抗抗体 | 1瓶×6mL | 1瓶×12mL |
| 通用稀释液（20×） | 样品/校准品通用稀释液 | 1支×10mL | 1支×15mL |
| 浓缩洗液（20×） | 20倍浓缩洗液 | 1支×15mL | 1支×25mL |
| 显色剂 | TMB、过氧化氢 | 1支×6mL | 1支×12mL |
| 终止液 | 稀硫酸 | 1支×3mL | 1支×6mL |
如需单独采购通用型组分，请提供对应的组分名称。
4. 需要但未包含的实验材料
· 蒸馏水或去离子水，一次性离心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套枪头；
· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具；
· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振荡器（如有需要）、离心机、旋涡振荡器等辅助设备；
· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。
5. 试剂的准备及储存
· 1×洗液的配制：浓缩洗液（20×）如有晶体析出，需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
· 1×通用稀释液的配制：用蒸馏水1:20稀释，例如：10mL的20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水，混合均匀。
· 工作校准品的配制：校准品开封前应离心30秒，确保所有校准品集中于底部；
准备7个离心管，将1×校准品（S1）按需吸取一定量用“1×通用稀释液”依次倍比稀释6个梯度至S7，共配制7个浓度的校准品，依次为：S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7，如下图所示，“1×通用稀释液”作为零浓度校准品S0，共8支校准品。
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6. 样品采集、预处理及储存
· 血清：使用血清采集管采集全血，室温静置待血细胞凝集后取的血清，或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，样品冻融不超过2次。
· 血浆：使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和，避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测，如不能及时进行检测，应等分为多份，储存在-20℃及以下温度条件，储存时间不超过6个月，样品冻融不超过2次。
· 组织：组织称重后剪碎，将剪碎的组织加入裂解液，一般按1:4-1:9的重量体积比，比如100mg的组织样品对应400uL的裂解液，具体可根据实验需要适当调整，最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
· 细胞：取适量细胞，于冰上进行超声破碎，5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
· 细胞上清：取细胞上清于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
7. 实验步骤
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右，也可置于37℃温箱快速回温至室温。
注意：酶标板未恢复室温前，请勿开封。
| 1 | 每孔加入校准品/待测样品50μL，之后每孔再加入一抗抗体工作液50uL。 |
| 2 | 盖上封板膜，在37℃下孵育60分钟。 |
| 3 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 4 | 每孔加入100μL酶标二抗。 |
| 5 | 盖上封板膜，在37℃下孵育30分钟。 |
| 6 | 洗板5次，最后一次洗板后弃去残留洗液，倒扣酶标板，在干净的吸水纸上拍干。 |
| 7 | 每孔加入100μL显色液 |
| 8 | 37℃下避光孵育15分钟。 |
| 9 | 每孔加入50μL终止液。 |
| 10 | 使用酶标仪在450nm检测波长及620~690nm参比波长条件下测定吸光度值，如果没有参比波长则仅选择450nm波长进行检测。如果最高浓度校准品OD值过高，应立即在405/630nm双波长条件下检测。 |
8. 结果计算
建议使用四参数逻辑（4-P）曲线拟合：以浓度值为横坐标，吸光度值为纵坐标；
建议使用专业化软件进行结果拟合和计算，如ELISA CALC、SPSS、Graphpad Prism等。示例数据
以下数据和曲线仅供参考，实验者需根据自己的实验数据建立标准曲线。
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9. 检测的局限性
样本浓度超出检测范围上限时，应当进行适当加大稀释倍数后再次检测，计算结果应当乘上稀释倍数。样本浓度低于LOQ定量限时，检测结果无法进行准确定量。
10. 产品性能指标
以下结果基于校准品的浓度值实验得出，未纳入基质效应等其他因素的潜在影响。
灵敏度：0.28ng/mL。
精密度：板内精密度CV＜10%（N=20），板间精密度CV＜15%（N=20）。
特异性（Analytical specificity）：其他相关因子在稀释缓冲液中制备为10μg/mL测定，没有观察到明显的交叉反应。
