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黄鼠油酸检测试剂盒

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 线性范围:6.4-400 nmol/mL

1. 预期用途

本试剂盒用于检测血清、血浆等样本中油酸浓度,仅供研究使用。

2. 检测原理 

试剂盒采用双抗体夹心法原理:将捕获抗体包被于酶标板上,捕获样品及校准品中待测物,加入辣根过氧化物酶标记的酶标二抗,结合形成抗体-抗原-抗体-HRP”免疫复合物,加入TMB显色后,若样本中有待测物则显蓝色,加入终止液停止反应。检测过程中游离的成分均被洗去,用酶标仪在450 nm处测OD值,颜色的深浅和样品中的待测物含量呈正比,通过绘制标准曲线计算出样本中待测物的浓度。

3. 包含的实验材料实验材料

Label

组成成分

Kit Components

数量(48T

Quantity

数量(96T

Quantity

酶标板

预包被捕获抗体的酶标板

8×6

8×12

校准品(10×

待测物(4000 nmol/mL

1×100μL

1×200μL

酶标抗体(100×

100倍浓缩HRP酶标记的检测抗体

1×50μL

1×100μL

通用稀释液(20×

样品/校准品/酶标抗体通用稀释液

1×10mL

1×15mL

浓缩洗液(20×

20倍浓缩洗液

1×15mL

1×25mL

显色剂

TMB、过氧化氢

1×6mL

1×10mL

终止液

稀硫酸

1×3mL

1×6mL

如需单独采购通用型组分,请提供对应的组分名称。

4. 需要但未包含的实验材料

· 蒸馏水或去离子水,一次性离心管、一次性手套等耗材;

· 移液器、多通道移液器及配套枪头;

· 烧杯、量筒、试剂瓶等容器具;

· 用于封贴微孔板的封板膜或其他替代材料;

· 微孔板振荡器(如有需要)、离心机、旋涡振荡器等辅助设备;

· 恒温培养箱、恒温水浴箱、酶标仪、洗板机。

5. 试剂的准备及储存

· 洗液的配制:浓缩洗液(20×)如有晶体析出,需在37℃下加热至晶体全部溶解后使用。用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL浓缩洗涤液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。

通用稀释液的配制:用蒸馏水1:20稀释,例如:10mL20×浓缩通用稀释液加入190mL的蒸馏水,混合均匀。

酶标抗体工作液的配制:100×酶标抗体用“1×通用稀释液1:100倍稀释,例如:10uL的(100×)酶标抗体加入990uL“1×通用稀释液,混合均匀。配制好的酶标抗体工作液可以在2~8℃保存8h

· 工作校准品的配制:校准品开封前应离心30,确保所有校准品集中于底部;

准备7个离心管,将10×校准品按需吸取一定量用“1×通用稀释液稀释10倍配制成校准品S1。例:50uL10×校准品+450uL“1×通用稀释液,制备得到500μLS1浓度校准品。在随后的6个离心管中分别加入250μL“1×通用稀释液,在这6个试管中(S2~S7)将S1校准品依次倍比稀释6个梯度至S7,共配制7个浓度的校准品,依次为:S1S2S3S4S5S6S7,如下图所示。“1×通用稀释液作为空白校准品S0

 

6. 样品采集、预处理及储存

· 血清:使用血清采集管采集全血,室温静置待血细胞凝集后取的血清,或直接在1000×g下离心15分钟取得血清。操作应柔和,避免溶血发生。获取的血清应及时进行检测,如不能及时进行检测,应等分为多份,储存在-20℃及以下温度条件,储存时间不超过6个月,样品冻融不超过2次。

· 血浆:使用EDTA或肝素采血管收集血浆。全血采集后以1000×g离心15分钟取得血浆。操作应柔和,避免溶血发生。获取的血浆应及时进行检测,如不能及时进行检测,应等分为多份,储存在-20℃及以下温度条件,储存时间不超过6个月,样品冻融不超过2次。

· 组织:组织称重后剪碎,将剪碎的组织加入裂解液,一般按1:4-1:9的重量体积比,比如100mg的组织样品对应400uL的裂解液,具体可根据实验需要适当调整,最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟,取上清检测。

· 细胞:取适量细胞,于冰上进行超声破碎,5000×g离心5-10分钟,取上清检测。

· 细胞上清:取细胞上清于5000×g离心5-10分钟,取上清检测。

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