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小鼠肝炎病毒抗体(MHV-Ab)ELISA检测试剂盒仅供研究使用
实验原理：
试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab）捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、阴性和阳性对照，经过温育并彻底洗涤，再加入HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），判定阴阳性。
试剂盒组成：
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 96孔 | 48孔 | 无 |
| 阴性对照 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 阳性对照 | 0.3mL | 0.3mL | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
试剂盒操作步骤：
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔，阴性、阳新对照孔各加50μL对照品，样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。
3.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
4. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
5. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
6. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验所需自备试验器材：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
实验结果计算：
绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
试剂盒性能：
1. 阴性对照OD值：小于0.2。
2. 阳性对照OD值：大于0.8。
3、阳性判断（Cut-Off值）：阴性对照OD值+0.25，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，为阴性。
4、重复性：板内变异系数小于15%。
技术小提示：
1. 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。
2. 为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。
3. 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。
4. 混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；假如微孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。
5. 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。
产品有效期：6个月
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