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果糖-1,6-二磷酸
（ Fructose-1,6 Diphosphate ，FDP）试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
果糖 1,6-二磷酸是机体内的高能代谢物和代谢调控剂，是糖酵解途径的重要中间体，广泛存在于动植物和微生物体内，能影响细胞内钾离子的浓度，改善葡萄糖和其他能量底物的代谢，促进组织氧的释放，广泛应用于临床医药制剂。
测定原理
醛缩酶催化果糖 1,6-二磷酸降解，产物与 DNPH 缩合成紫红色物质，在 540nm 有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、研钵、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制
试剂一：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 0.4mL×1 支，4℃避光保存。
试剂三：液体 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：液体 16mL×1 瓶，4℃保存。
样品处理
1. 组织：按照质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴匀浆后于4℃，10000g 离心10min，取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后 4℃，10000g 离心 10min，取上清待测。
3. 液体：直接检测。
测定操作
|
| 对照管 | 测定管 |
| 样品（μL） | 20 | 20 |
| 试剂一（μL） | 44 | 40 |
| 试剂二（μL） |
| 4 |
| 充分混匀，37℃反应 30min | ||
| 试剂三（μL） | 40 | 40 |
| 充分混匀，37℃温育 10min | ||
| 试剂四（μL） | 160 | 160 |
| 充分混匀，于37℃温育10min，于微量石英比色皿/96孔板，蒸馏水调零，测定540nm处吸光值，记为 A对照管和 A测定管，△A=A测定管- A对照管 | ||
计算公式
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线：y= 0.6971x+0.0012，R2=0.9983
1．按照质量计算
FDP（mg/g）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 18.94×(△A-0.0012)÷W
2．按照细胞数量计算
FDP（mg/104cell）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷（W×细胞数量÷V 样总）
= 18.94×(△A-0.0012)÷细胞数量
3．按照液体体积计算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.6971×V 反总÷V 样
= 18.94×(△A-0.0012)
V 反总：反应总体积，0.264mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，
g；V 样总：加入提取液体积，1mL
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线：y=0.3486x+0.0012，R2=0.9983
1．按照质量计算
FDP（mg/g）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）
= 37.88×(△A-0.0012)÷W
2．按照细胞数量计算
FDP（mg/104cell）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷（W×细胞数量÷V 样总）
= 37.88×(△A-0.0012)÷细胞数量
3．按照液体体积计算
FDP（mg/mL）= (△A-0.0012) ÷0.3486×V 反总÷V 样
= 37.88×(△A-0.0012)
V 反总：反应总体积，0.264mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；W：样本质量，
g；V 样总：加入提取液体积，1mL
注意事项
最低检出限为 1.72 mg/L。
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